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    如何使用ELISA試劑盒進行比色?

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      ELISA試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人血管內皮細胞生長因子(VEGF)水平。用純化的人血管內皮細胞生長因子(VEGF)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入血管內皮細胞生長因子(VEGF),再與HRP標記的血管內皮細胞生長因子(VEGF)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成較終的黃色。顏色的深淺和樣品中的血管內皮細胞生長因子(VEGF)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人血管內皮細胞生長因子(VEGF)濃度。
     
      ELISA試劑盒的比色實驗:
     
      比色前應先用潔凈的吸水紙拭干板底附著的液體,然后將板正確放入酶標比色儀的比色架中。以軟板為載體的試驗,需先將板置于標準96孔的座架中,才可進行比色。較好在加底物液顯色前,先將軟板邊緣剪凈,這樣,此板就可完全平妥坐入座架中。比色時應先以蒸餾水校零點,測讀底物孔(未經任何反應僅加底物液的孔)和空白孔(以生理鹽水或稀釋液代替標本作全過程的孔),以記錄本次試驗的試劑狀況。其后可用空白孔以蒸餾水校零點,以上各孔的吸光度需減去空白孔的吸光度,然后進行計算。
     
      比色結果的表達以往通用光密度(oplical density,OD),現按規定用吸光度(absorbence,A),兩者含義相同。通常的表示方法是,將吸收波長寫于A字母的右下角,如OPD的吸收波長為492nm,表示方法為"A492nm"或"OD492nm"。
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